傳統(tǒng)轉染試劑有一定的細胞毒性,在轉染過程由于提高細胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素如陽離子脂質體。帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。
Gibco血清中含有大量的蛋白質,在轉染過程中,帶負電的蛋白質可能干擾陽離子脂質體對核酸的吸附,影響轉染效率。另外,使用脂質體等轉染試劑時,由于含血清轉染會將血清中的蛋白帶入細胞,引發(fā)細胞毒性,導致轉染效率降低,故不能有血清轉染。這些轉染試劑要求在轉染前換無血清培養(yǎng)基,轉染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,這其實是為了減輕轉染造成的細胞毒性。
可使用非脂質體的轉染試劑,比如納米材料試劑,轉染過程中就可以加血清,這樣也可以提高細胞轉染效率。
不同細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的??稍谝淮螌嶒炃白鲆粋€預實驗,細胞是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加Gibco血清就會受影響。所以,普通的轉染試劑一定要進行預實驗和條件優(yōu)化。
細胞毒性的大小往往意味著對細胞生理活動影響的大小。這會對相關研究數(shù)據(jù)產生嚴重的干擾,甚至影響研究的結論。因此,選擇一種高效方便的轉染試劑是細胞轉染成功的關鍵。