分子生物試劑中的BCA蛋白濃度測定試劑是根據(jù)目前常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成,實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單,高穩(wěn)定性,高靈敏度和高兼容性。BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,可兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween20,60,80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保EDTA低于10mM,無EGTA,二硫蘇糖醇低于1mM,β-巰基乙醇低于1mM。
此外,蛋白質(zhì)還可用雙縮脲試劑來檢測。雙縮脲試劑是一個用于鑒定蛋白質(zhì)的分子生物試劑。它是一個堿性的含銅試液,呈藍(lán)色,由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制,遇到蛋白質(zhì)顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(多肽),試液中的銅與多肽配位,絡(luò)合物呈紫色??赏ㄟ^比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境,因此它可被其他堿,如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀,會延長試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護反應(yīng)生成的絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?,從而使試劑失效?/div>